产品货号：
BTN130828
中文名称：
DNA去磷酸化试剂盒
英文名称：
DNA Dephosphorylation Kit
产品规格：
20T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是基于碱性磷酸酶的核酸去磷酸试剂盒。
保存：-20℃，有效期1年。
本试剂盒提供的试剂足够满足20次20μL体系的去磷酸化实验。
由于dNTP和ATP也是碱性磷酸酶的底物，所以如果DNA溶液中含有大量的dNTP（比如PCR产物中）或ATP，而目的是去除DNA溶液的磷酸基团，最好先将其去除，否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶活性，降低DNA去磷酸化效率。
一、去磷酸化反应（以纯化的DNA片段为例）
二、限制性酶切反应中的同步去磷酸化
酚/氯仿抽提去除酶步骤：
相关搜索：DNA去磷酸化试剂盒，DNA去磷酸化，DNA Dephosphorylation Kit
- 可以去除DNA、RNA和dNTP的磷酸基团。
- 用于克隆载体去磷酸化时，可以有效防止载体自连。
- 可用于测序或SNP分析前除去PCR反应中dNTP和焦磷酸盐。
- T4 PNK标记5' DNA末端前，用来去除DNA靶分子的磷酸基团。
- 模板可以是单链DNA，也可以是双链DNA；既可以是平末端，也可以是5'端突出或3'端突出的粘性末端。
- 在几乎所有限制性内切酶反应缓冲液中均有活性，故可以跟限制性内切酶酶切反应同步进行，减少操作步骤。
- 去磷酸化处理后的反应液不需要纯化，灭活酶后可直接用于后续的连接反应和标记反应。
- 65℃15分钟的热处理可以使酶不可逆地彻底灭活，不用担心残留的活性影响后续的实验。
| 组分 | 规格 |
| 10×去磷酸化缓冲液 | 50μL |
| 碱性磷酸酶 | 20μL |
| 超纯水 | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
本试剂盒提供的试剂足够满足20次20μL体系的去磷酸化实验。
由于dNTP和ATP也是碱性磷酸酶的底物，所以如果DNA溶液中含有大量的dNTP（比如PCR产物中）或ATP，而目的是去除DNA溶液的磷酸基团，最好先将其去除，否则它们会耗掉大量的碱性磷酸酶活性，降低DNA去磷酸化效率。
一、去磷酸化反应（以纯化的DNA片段为例）
- 在微量离心管中配制下列反应液（20μL）：
成分 用量 胶回收的DNA片段 1pmol（相当于1μg 3kb的线状质粒） 10×去磷酸缓冲液 2μL 碱性磷酸酶 0.5μL 超纯水 到20μL - 建议在37℃反应30分钟（对平末端、5'端突出或3'端突出的DNA片段均采用此保温条件）。
- 65℃反应15分钟变性碱性磷酸酶。
- DNA片段可以直接用于连接。
二、限制性酶切反应中的同步去磷酸化
- 本碱性磷酸酶在几乎所有限制性内切酶的缓冲液中都有活性，故所以可以按1μg 3Kb长度的DNA加1μL碱性磷酸酶的比例（对应的是DNA末端数量）直接加到限制性内切酶的反应液中。反应液中最好不含dNTP和ATP。
- 加热灭活限制性内切酶和碱性磷酸酶（灭活条件根据限制性内切酶不同而不同，但不能低于65℃，时间不能短于15分钟，否则不能灭活碱性磷酸酶）。灭活后的样品可以直接用于后续实验。
- 如果不能采取加热灭活限制性内切酶和碱性磷酸酶，则需酚/氯仿抽提去除酶。(本试剂盒不提供相关试剂，需要从本公司另购相关试剂，下列操作仅供参考)。
酚/氯仿抽提去除酶步骤：
- 在反应液中加入超纯水使体积变成100μL，以免纯化过程中DNA丢失。如果有必须，可以加入和4μL核酸助沉剂提高回收效率。
- 加入100μL酚/氯仿/异戊醇25：24：1混合液震荡半分钟混匀，室温12000g离心3分钟，转移上清到新离心管中。
- 加0.1倍体积（即10μL）的3M乙酸钠溶液（pH5.2）。
- 再加入2.5倍体积（即250μL）的无水乙醇。
- 混匀后12000g 4℃离心10分钟，小心弃上清。
- 加入1mL 70%乙醇，短暂离心3分钟后小心弃上清。
- 短暂离心5秒，吸弃残留液体（约30～50μL）。
- 室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA，立即使用或放-20℃长期保存。
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